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中国科学院大连化学物理研究所专利：一种酵母菌落PCR菌体前处理的方法
中国科学院大连化学物理研究所 专利 酵母菌落 PCR菌体 前处理
2023/12/29
本发明公开了一种酵母菌落PCR菌体前处理的方法。该方法为：菌体经过灭活，两步酶解，最后煮沸的处理后，上清可直接用于PCR反应。本方法制备的样品可有效地扩增基因组上单拷贝、长片段基因。此方法为大规模的酵母筛选和鉴定提供了新的途径。
微生物研究所微生物资源前期开发国家重点实验室杜文斌团队最近报道了一种可重复使用的微流体芯片，该芯片基于阶梯乳化（Step Emulsification）产生纳升液滴阵列，用于同时对8个样品进行片上多重荧光数字PCR。装置包含两块玻璃板，可实现预先填充矿物油的快速组装。通过由单个压力泵同时驱动8个样品通道的阶梯乳化，利用喷嘴阵列快速产生液滴，生成的液滴在U形腔室中可自组装成单层液滴阵列，每个腔室可容...
Quantification of Vibrio vulnificus in shellfish by conventional *PCR and real time PCR
Vibrio vulnificus gram-negative bacteria sepsis gastroenteritis pathogens seafood nucleic acid dye
2015/1/28
Vibrio vulnificus is a Gram-negative estuarine bacterium that can cause wound infection, primary septicemia and gastroenteritis in susceptible individuals. Since it is a notably lethal pathogen associ...
采用烟草靶斑病菌YC-9, LJT-8和QYS-7为DNA模板，初步筛选SRAP引物组合；采用L16(45)正交试验设计，对烟草靶斑病菌的SRAP-PCR反应体系中的Mg2+、dNTPs, Taq DNA聚合酶、引物和DNA模板浓度等5个因素进行优化试验。结果表明：共筛出13对扩增条带清晰且多态性好的引物组合；烟草靶斑病菌的最佳SRAP反应体系为Mg2+浓度2.0 mmol/L、dNTP浓度200...
应用LH-PCR研究党参、麻黄和独一味内生细菌多样性
药用植物 细菌多样性 免培养 LH-PCR
2013/9/17
通过直接提取药用植物样品的总DNA，采用长度多态片段PCR (length heterogeneity PCR, LH-PCR)技术研究四川省甘孜藏族自治州的党参、麻黄和独一味3种药用植物内生细菌多样性.结果表明： 同种植物根、茎、叶的LH-PCR图谱相似度很高，条带丰富度差别不大；但不同植物样品之间的差异较大.党参的植物样品条带丰富度最大，麻黄次之，独一味最低.3种药用植物中474 bp长度的细...
PCR-RFLP和多重PCR技术检测常见病原性丝状真菌的实验研究
丝状真菌 PCR-RFLP 多重PCR 分子鉴定
2012/8/10
目的 建立检测常见丝状真菌感染病原菌的PCR-RFLP和多重PCR方法。方法 建立以PCR技术为基础的限制片段长度多态性(RFLP)方法 ,首先用真菌通用引物扩增丝状真菌的ITS区,然后用限制性核酸内切酶对PCR产物进行酶切。用4种丝状真菌的特异性引物建立多重PCR体系,用该体系检测单模板、双模板和三模板的扩增情况,并测定该体系的特异性和敏感性。结果 用PCR-RFLP技术能够鉴别5种常见丝状真菌...
实时荧光定量PCR在侵袭性曲霉病诊断中的研究进展
侵袭性曲霉病 实时荧光定量PCR 标准化 应用
2012/8/6
实时荧光定量PCR自20世纪90年代初起被用于侵袭性曲霉病的诊断研究,具有较好的灵敏度和特异度,但由于技术操作多种多样,尚未统一,该技术仍未正式列入诊断标准。近年来,随着研究增加,对该技术操作的标准化研究取得了明显的进展。现从技术问题,包括标本种类、DNA提取方式、靶序列的选择、国际标准化研究进程以及该技术在侵袭性曲霉病的诊断价值和应用两个层面进行综述。
目的 克隆孢子丝菌未知过氧化氢酶基因,命名为Sscat基因。方法 根据生物信息库中7种已知真菌过氧化氢酶氨基酸序列的高度保守区域设计简并引物,PCR扩增获得部分Sscat基因cDNA片段,随后应用RACE技术分别扩增其3’端和5’端未知序列。结果 Sscat基因cDNA序列全长1746 bp,其中包括5’端121 bp的非编码区、1500 bp的编码区和109 bp的3’端非编码区。该基因编码49...
红色毛癣菌菌株的特异性PCR鉴定方法研究
红色毛癣菌 PCR 须癣毛癣菌 皮肤癣菌
2012/8/10
目的 建立一种快速的红色毛癣菌分子生物学鉴定方法。方法 根据红色毛癣菌保守区域-真菌核糖体DNA(rDNA)的转录间隔区(ITS)设计特异性引物,采用上游:ITS19865’GAC ACC AAG AAA AAA TTC TCT GAA GA3’,下游:ITS24415’GTC CTG AGG GCG CTG AA3’为引物对45株红色毛癣菌、5株须癣毛癣菌和1株紫色毛癣菌菌株的DNA进行PCR扩...
重复序列PCR(rep-PCR)指纹分析技术在病原真菌鉴定和分型中的应用
重复序列PCR 病原真菌 基因分型
2012/8/10
随着医学科学的发展及人们对深部真菌感染的重视,越来越多的新技术用于临床真菌的检测和鉴定。重复序列PCR(rep-PCR)指纹分析技术因其高分辨力、快速、简便、经济等优势,已成为分析真菌基因组、明确菌属间克隆来源的重要方法。本文就rep-PCR指纹技术及其自动化DiversiLab System在病原真菌分类鉴定和流行病学研究中的应用加以综述。
本文采用免培养的16S rDNA梯度凝胶电泳技术(DGGE)对集约化海水网箱养殖川纹笛鲷Lutjanus sebae及圆
白鲳Ephipp orbis消化道壁优势菌群结构进行了比较分析。研究结果显示川纹笛鲷及圆白鲳消化道壁存在着大量
细菌群落，对DGGE指纹图谱聚类分析表明两种鱼肠道壁及胃壁菌群组成相似度高于50％ ，其中二者肠道壁细菌
组成相似性最高(67％)，这些可能与两种鱼养殖在同一水...
用一个简单快速的RT-PCR技术筛选白细胞介素-6作用相关基因
白细胞介素-6 差异表达基因 骨髓瘤细胞
2008/6/11
为了研究白细胞介素-6(IL-6)作用相关基因以及一些可能受IL-6调控的基因，利用一个简单快速的以PCR为基础的方案，检测了IL-6处理和未处理的Sko007细胞中基因表达的差异，克隆并鉴定了差异表达基因的cDNA片段.首先用6-mer寡核苷酸引物进行反转录从而最大限度地将mRNA编码区序列生成cDNA；然后用2或3个较长的随机引物进行PCR扩增，并以不同引物组合重复PCR增扩；扩增产物在2%琼...
可直接克隆PCR产物的克隆载体的构建
PCR产物 克隆载体 pUC118 大肠杆菌JM109
2008/1/3
本文描述一种构建与PCR产物直接连接的克隆载体的方法。以高拷贝克隆载体pUC118为骨架载体，在pUC118质粒氨苄抗性基因的Eam1105 I 酶切位点上，以点突变的方式封闭Eam1105 I 酶切位点。经转化大肠杆菌JM109证实，该改造过的pUC118质粒，可使宿主细胞仍具有氨苄抗性。将一人工合成的具有两个Eam1105 I 酶切位点的互补寡聚核苷酸链（两端具有BamH I 接头）插入已封闭...
ERIC-PCR技术在李斯特氏菌种、菌株鉴定中的应用ERIC-PCR on Identification of Listeria Species and Strain
肠杆菌基因间重复一致序列 PCR 李斯特氏菌 DNA指纹图谱
2007/12/30
摘要应用肠杆菌基因间重复一致序列聚合酶链反应技术（ERIC-PCR）对李斯特氏菌基因组DNA进行分析，结果显示，李斯特氏菌种间DNA指纹图谱带型差异较大；单核细胞增生性李斯特氏菌株间及相同血清型不同来源的菌株，其DNA指纹图谱带型也有明显差异。在单核细胞增生性李斯特氏菌各株的DNA指纹图谱中发现1600bp的种专一性扩增带。结果表明，ERIC-PCR技术可用于李斯特氏菌种、菌株的鉴定及进一步分型研...