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探讨转染胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）基因的大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植对大鼠脊髓损伤后神经轴突再生的影响。方法：取SD雌性大鼠的双侧股骨，冲洗髓腔分离培养得到的BMSCs，通过荧光素标记技术检测细胞表面标志物CD29、CD90、CD34、CD45，以确认是否得到BMSCs。构建GDNF过表达慢病毒用以感染BMSCs，加入感染分数分别为10、50、80、100、150、200的重组...
载BDNF基因PEG-PLGA纳米微球的制备及其转染外源性神经干细胞的研究
纳米微球 神经干细胞 基因治疗 转染
2020/6/11
构建转染后能表达神经修复功能蛋白的载脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor，BDNF）基因的聚乙二醇-聚乳酸-羟基乙酸纳米微球［poly(ethylene glycol)-poly(lactin-co-glycolic acid)-BDNF-nanoparticles,PEG-PLGA-BDNF-NPs］；探讨其转染外源性神经干细胞（neural s...
通过慢病毒将血管内皮生长因子（VEGF）基因转染于人脂肪干细胞（HADSCs），检测其上清液（CM）中生长因子的表达，并用其上清液作用于人皮肤成纤维细胞（HDFs）及人脐静脉内皮细胞（HUVECs），观察对这2种细胞活力和迁移的影响。方法：准备HADSCs、HDFs及HUVECs 3种细胞并鉴定；将携带VEGF165基因的慢病毒转染于HADSCs，定时收集上清液；ELISA法检验上清中生长因子分泌...
双基因转染犬骨髓间充质干细胞复合HA/ZrO2生物材料新型组织工程骨的构建及其体外成骨能力的研究
组织工程 骨 间充质干细胞 骨髓 基因,修饰 骨形态发生蛋白质2 血管内皮生长因子
2016/12/12
目的 构建骨形态发生蛋白2(BMP-2)、血管内皮细胞生长因子165(VEGF165)双基因修饰的骨髓间充质干细胞(BMSCs)复合羟基磷灰石复合二氧化锆(HA/ZrO2)生物材料的新型组织工程骨,并观察该组织工程骨在体外的成骨能力。方法 采用有机泡沫作为模版,干铺烧制法制备新型的蜂窝状HA/ZrO2梯度生物材料,电镜观察新型生物材料的表面特性,生物力学试验机检测其力学性能。采取1岁龄健康beag...
NFκB核定位基序增强超声微泡介导的外源基因转染效率
微泡 核定位信号 NFκB 基因转染
2014/11/14
评价NFκB核定位基序增强超声靶向微泡破坏（UTMD）介导的外源基因转染效率的价值。方法 构建人基质细胞衍生因子1α（phSDF-1α）质粒（phSDF-1α组），并插入NFκB核定位基序，构建具有核输入功能的目的基因质粒phSDF-1α-NFκB（phSDF-1α-NFκB）。用Cy3核酸染料标记两种质粒后在优化的UTMD条件下分别转染人脐静脉血管内皮细胞。CCK-8检测细胞存活率，流式细胞仪和...
观察重组血管紧张素（1-7）[angiotensin 1-7，Ang(1-7)]对大鼠急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)后细胞外基质重构的影响，并探讨其可能的分子机制。 方法 40只成年雄性SD大鼠按随机数字表法分为4组：假手术组(SHAM)、心肌梗死组(MI)、报告基因组(MI+EGFP)和Ang(1-7)组[MI+Ang(1-7...
检测真核质粒pMAGEA3-IRES-SEA经过电穿孔转染在小鼠中的转录。方法 将葡萄球菌肠毒素A(staphylococcal endotoxin A，SEA)和喉癌来源的黑色素瘤抗原A3(melanoma- associated antigen A3，MAGE-A3)，构建成基因共表达的真核质粒pMAGEA3-IRES-SEA。将pMAGEA3-IRES-SEA用电转染的方法免疫BALB/C小...
探讨肌肉生长抑制素前肽(myostatin propeptide, MPRO)对C2C12成肌细胞葡萄糖摄取、氧化及糖原合成的影响及其作用机制。方法 诱导成熟的C2C12成肌细胞分为对照组、胰岛素组、绿色荧光蛋白(GFP)组、胰岛素+GFP组、MPRO组及胰岛素+MPRO组,经相应处理后应用2-脱氧-右旋-[1-14C]葡萄糖检测MPRO对C2C12细胞葡萄糖摄取、氧化及糖原合成的影响,应用Wes...
重组慢病毒介导TGF-β3/BMP-2联合基因转染兔骨髓间充质干细胞，诱导其软骨细胞分化，与TGF-β3单基因转染诱导其软骨细胞分化的效率作比较。方法 全骨髓贴壁法分离、培养骨髓间充质干细胞，流式细胞术检测细胞表面抗原，培养后通过重组慢病毒分别转染阴性对照(N组)、TGF-β3单基因(T组)、TGF-β3/BMP-2联合基因(TB组)，培养14 d后，荧光显微镜下观察各组细胞形态，RT-PCR、W...
ACE2基因转染对ApoE-/-小鼠动脉硬化黏附分子的影响
血管紧张素转化酶2 基因 克隆 动脉粥样硬化
2014/4/22
构建血管紧张素转换酶2(ACE2) 的复制缺陷重组腺病毒Ad-ACE2，并观察其对载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠动脉硬化黏附分子的影响及意义。方法 采用RT-PCR反应，从小鼠肾脏组织中扩增出小鼠ACE2 基因全长的cDNA 序列，克隆到pMD18-T载体，再亚克隆到pDC316载体，构建穿梭质粒(pDC316-ACE2)。穿梭质粒与腺病毒骨架质粒进行同源重组，形成重组腺病毒质粒，重组...
构建C型凝集素受体(C-type lectin receptor，CLRs)过表达/siRNA慢病毒载体，并将其瞬时转染树突状细胞(dendritic cell，DC)。方法 免疫磁珠分离、培养及鉴定胎盘和蜕膜来源的DC;构建CLRs过表达/siRNA慢病毒载体并转染DC;抽提转染CLRs过表达/siRNA慢病毒后的DC的总RNA;RT-PCR检测DC转染慢病毒前后CLRs基因mRNA表达量。结果...
观察人脐血源基质细胞(hUCBDSCs)经腺病毒介导的缝隙连接蛋白43(Cx43)转染后Cx43基因表达的变化以及转染前后分别对CD4+T分泌IL-4、CD8+T分泌IFN-γ的影响。方法 用重组腺病毒Ad-Cx43-GFP转染hUCBDSCs，荧光显微镜报告基因GFP的表达并计算转染效率，RT-PCR法、Western blot法、免疫荧光法检测hUCBDSCs转染前后Cx43基因及蛋白表达情况...
探讨转染Cx43(Connexin 43)人脐血源基质细胞(hUCBDCs)对人急性淋巴细胞白血病细胞SUP-B15增殖的影响。方法 重组腺病毒转染以上调人脐血源基质细胞Cx43表达，建立人脐血源基质细胞和SUP-B15细胞共培养模型，选取共培养72 h为时间点收集悬浮SUP-B15细胞，采用CCK-8检测SUP-B15细胞的增殖，流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期。结果 人脐血源基质细胞抑制SUP...
GFP-LC3真核表达载体构建、定位及胶质瘤U87稳定转染细胞系筛选
绿色荧光蛋白质类 自噬 神经胶质瘤 LC3
2014/2/24
构建GFP-LC3真核表达载体，验证其在胶质瘤U87细胞系中对细胞自噬现象的指示作用，并获得稳定转染该载体的U87细胞。方法 以人外周血cDNA为模板扩增全长LC3基因，通过分子生物学操作将其导入pcDNA3-GFP中，得到重组质粒pcDNA3-GFP-LC3。将重组及对照质粒转染胶质瘤U87细胞系，雷帕霉素(Rapamycin)处理48 h后用Western blot方法检测细胞中自噬相关蛋白表...