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本申请提供了一种工程化的Cas12i核酸酶；其包含一种、两种、三种或四种以下基于参比Cas12i核酸酶的突变：(1)将参比Cas12i核酸酶中与PAM相互作用的一个或多个氨基酸替换为带正电的氨基酸；和/或(2)将参比Cas12i核酸酶中参与打开DNA双链的一个或多个氨基酸替换为带芳香环的氨基酸；和/或(3)将参比Cas12i核酸酶中位于RuvC结构域并与单链DNA底物相互作用的一个或多个氨基酸替换...