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基于长片段PCR扩增的牡蛎疱疹病毒基因组高通量测序
栉孔扇贝 高通量测序 长片段PCR 牡蛎疱疹病毒
2019/1/21
为获取2001年低温冻存栉孔扇贝感染牡蛎疱疹病毒（OsHV-1）变异株（ZK2001）基因组序列，并分析ZK2001与其他OsHV-1变异株的序列差异和系统发育关系，利用基于长片段PCR的基因组DNA的扩增和富集技术，获取2001年栉孔扇贝感染OsHV-1变异株的基因组DNA；再使用Illumina Hiseq 2500 PE250高通量测序平台对其测序。最后分析ZK2001与OsHV-1其他变异...
上海交通大学遗传学实验课件 PCR技术及其产物电泳
上海交通大学 遗传学实验 课件 PCR技术及其产物电泳
2010/6/24
上海交通大学遗传学实验课件 PCR技术及其产物电泳。
建立了Taqman 实时定量RT-PCR方法检测传染性造血器官坏死病毒(IHNV)。选取IHNV病毒的N蛋白基因保守序列，利用Primer Express 2.0软件设计引物和探针。以梯度稀释的含有IHNV目的扩增片段的质粒作为标准品，进行定量RT-PCR反应以确定检测灵敏度。病毒浓度在5×106 －5个拷贝，共7个数量级的范围内，定量RT-PCR反应有“S”型扩增曲线，检测灵敏度为5个拷贝。根据...
差异显示反转录PCR技术研究进展
mRNA 差异显示 聚合酶链反应
2008/9/27
分析一对细胞或组织在不同状态下基因表达的差异，已成为分子生物学研究领域的热点之一.近年来，用于识别差异表达基因的方法已发展起来多种.DDRT-PCR是近年来较为广泛应用的一种技术.理论上，DDRT-PCR技术比较简单，但实施起来却存在着假阳性率高，凝胶中单条cDNA带成分不均一, 所获cDNA仅代表着mRNA 3′UT区(约300 bp)以及一些低拷贝数mRNA不能有效被呈现等问题.对DDRT-P...
亲和力是影响改型单链抗体应用于临床的重要因素之一.利用巨型引物PCR定点诱变方法，设计并化学合成出两组含多个突变位点的简并引物，在第一轮PCR中使用简并引物分别扩增出含突变碱基的两条特异性的DNA片段，即巨型引物，将其经琼脂糖凝胶电泳分离纯化后，作为3′和5′的两端引物应用于第二轮PCR反应中.通过改变标准PCR反应条件，调整引物与模板的浓度，扩增出特异性较强的目的DNA条带.PCR产物经回...
用差异显示反转录PCR银染技术研究植物基因表达的差异
差异显示反转录PCR 银染 拟南芥 ast突变型
2008/6/12
通过调整差异显示反转录PCR(DDRT-PCR)中总RNA、锚定引物、随机引物、cDNA和dNTP等关键试剂的用量，优化了适用于银染检测的DDRT-PCR方法.PCR扩增产物经6%变性聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳分离后，银染能检测到多而清晰的条带.泳道中的条带数最少为40个，最多达80个，平均为60个，条带大小分布在100～900 bp范围，灵敏度为5 pg/mm2 .此方法操作简便快速，灵敏度...
摘要基因扩增是介导细胞产生耐药性的一种普遍性机制。为探讨MTX耐药的小鼠细胞中与耐药机制形成有关的分子遗传学背景，应用差异PCR技术，检测了MTX耐药细胞中DHFR基因的扩增和过表达，并对myc及p53基因状态与dhfr扩增之间的相关性进行了探讨。结果表明：dhfr的扩增和过表达直接介导细胞耐药。未检测到c-myc的扩增和p53拷贝数的变化；也未检测到c-myc mRNA水平的改变,但p53基因的...
用复合PCR检测DXS7132和DXS6804的单倍型
短串联重复序列 X染色体 遗传多态性 亲权鉴定
2008/1/26
摘要建立X染色体短串联重复基因座DXS7132和DXS6804的复合扩增系统，并用聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染技术进行分型，调查广东汉族人群该二基因座的多态性。结果发现DXS7132有7个等位基因，扩增产物的长度在276~300bp；DXS6804有6个等位基因，扩增产物的长度在177~201bp。序列分析揭示这两个基因座的重复单位均为四核苷酸重复。由于基因组作图信息显示DXS7132和DXS6804...
PCR-90型DNA扩增仪简介
PCR-90型 DNA
2008/1/16
PCR-90型DNA扩增仪是我所为适应聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,以下简称PCR）技术迅速发展的需要研制的最新仪器，它是生物实验技术和自动化技术、微电子技术结合的产物。
用PCR检测恶性纤维组织细胞瘤体DNA的变化1)
PCR 恶性纤维组织 细胞瘤体 DNA
2008/1/15
为了进一步探讨恶性纤维组织细胞瘤的癌变机理，作者采用聚合酶链反应PCR对该肿瘤患者的瘤细胞和淋巴细胞DNA进行了配对扩增实验。如果来自同一个体的两种组织的DNA序列完全一致，经聚合酶链反应扩增后的DNA片段大小应完全相同，如果经扩增后的片段大小不一致或有片段的丢失增加，则提示DNA序列有改变。
摘要为了建立一种基于多重实时荧光相对定量PCR技术并应用之于唐氏综合征分子诊断, 选择21号染色体上唐氏综合征特异区域基因片段(DSCR3)为目的基因, 以12号染色体上的磷酸甘油醛脱氢酶基因(GAPDH)为参照基因, 设计合成两对引物以及分别以不同荧光标记的TaqMan探针, 在同一个反应管中进行扩增。以相对定量指标△CT值区分唐氏综合征患者与正常人。采用EB 病毒转化技术, 把唐氏综合征患者外...
用长PCR方法检测含有较大缺失或插入的DNA大片段
长PCR 等位基因共扩增 缺失和插入
2008/1/9
选择位于19q13.3上的人类肌张力蛋白激酶基因(myotonin protein kina se gene,MT-PK)为靶基因(基因全长为14kb),以G+C含量较高且含有1kb缺失或插入,由基因第8内含子中的Alu±1kb的5'端至第15外显子3'非编码区中的CTG重复序列3'端,即两者间的距离为5.3kb的DNA片段为待扩增靶序列,通过优化DNA聚合酶的组合和反应缓冲体系,点考查了含有Al...
摘要
利用PCR合成DNA长片段（Synthesis Large Frament DNA using PCR ，SLFD PCR）是一种有效的合成长片段DNA的方法。采用一段已知的500~600碱基的DNA片段为PCR模板，根据所要合成的DNA序列可以设计一系列的PCR引物，这些引物都位于模板DNA的5′端，长度为50~60 bp, 且从５′到３′方向顺序重叠 ,重叠碱基数目为12~15，全部引...