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摘要 利用快速可靠的基因突变检测方法研究中国人21-羟化酶缺乏症（21-hydroxylase deficiency ，21-OHD）基因突变特点及基因型和临床表型的关系。用8例非经典型患者、35例经典型患者及35例正常对照者基因组DNA作模板，用特定引物特异性扩增CYP21的两个片段，片段1从Exon1→Exon3，片段2从Exon3→Exon10。用片段1和片段2为模板进行第二轮PCR，用特定...
摘要为研究母亲环氧化物水解酶1基因(EPHXl)多态性与新生儿出生体重间关系。收集了某纺织厂342名女工的资料,用PCR-限制性片段长度多态性法分析母亲EPHXl基因型,采用多元线性逐步回归模型分析母亲EPHXl多态性与新生儿出生体重关系。结果发现调整主要混杂因素后EPHXl的His139Arg/AG139Arg基因型与新生儿出生体重有显著性相关(β±SE＝-149g±56,P＝0.0083)。经...
用限制性内切酶AluⅠ、缓冲液或空白处理人染色体标本,发现AluⅠ及缓冲液均能诱导出类C和G带,其中缓冲液诱导的类C带频率虽低于酶原液,但明显高于空白对照; 而G带的诱导率无明显差异。此外,用限制性内切酶H ae Ⅲ和 HinfⅠ及其缓冲液处理中国小型白兔外周血染色体标本,也诱导出了相应的类C和G带。
重组人脑乙酰胆碱酯酶的基因表达和生化毒理学性质
人脑乙酰胆碱脂酶 生化毒理学性质 真核表达
2008/1/5
摘要 人脑乙酰胆碱酯酶的全长cDNA序列克隆到真核高效表达载体pcDNA3.1中 ,并将pcDNA AChE转染人胚肾细胞株 2 93细胞 ,进行rhAChE的暂时表达 .真核细胞表达的rhAChE的生化性质与天然人脑AChE十分相似 .rhAChE的Km 值约为 137μmol L ;有过量底物抑制现象 ;可被胆碱酯酶抑制剂huperzineA和eserine抑制 (IC50 分别为 2 5×...
摘要 建立一种用于克隆全长基因的、限制性内切酶介导的重叠延伸法 .对全长基因进行分段扩增 ,并利用适当的限制性内切酶对基因序列内相应的限制性位点进行酶切 ,从而使分段扩增片段得以重叠并互为模板 ,在DNA聚合酶的作用下延伸获得全长基因 .将环氧合酶 1 (COX 1 )基因的外显子 9巧妙地拼接到了缺失外显子 9的COX 1cDNA片段中 ,获得了COX 1基因的全长cDNA .该方法分 3步进...
人血清载脂蛋白CII酶联免疫测定法的研究
载蛋白CⅡ 竞争性酶免疫测定 单价特异抗体 辣根过氧化物酶
2007/12/24
摘要 本文介绍一种特异、灵敏、简便人血清载脂蛋白CⅡ(apoCⅡ)竞争性酶兔疫测定法(Competitive Enzyme Immunoassay,CEIA)。单价特异抗体由免疫家兔获得。采用部分纯化的apoCs包被聚苯乙烯板。羊抗兔γ-球蛋白酶交联物用辣根过氧化物酶按简化过碘酸钠法制备。apoCⅠ、AⅠ、AⅡ以及LDL无交叉反应。本法最小检测量为25ng,标准曲线工作范围是1.5～30.0mg％...
摘要 为研究组织型基质金属蛋白酶抑制剂 (TIMPs)的分子作用机制 ,探讨了在 Pichia pastoris酵母中高效表达分泌型人组织型基质金属蛋白酶抑制剂 - 1 (TIMP- 1 )的技术路线 ,并对产物性质进行初步研究 .通过 PCR从含有 TIMP- 1基因的 p BS质粒获得了该基因的全长序列 ,构建了 p PIC9/T1表达载体 ,电击法转化酵母 ,通过表型筛选和 PCR鉴定证实了...
摘要 基质金属蛋白酶 - 9( MMP- 9)可促进恶性肿瘤的侵袭、转移 ,并在组织重建、胚胎发育以及伤口愈合等生理过程中发挥重要作用 .为研究这一蛋白的性质 ,并以之为靶标筛选抗肿瘤转移药物 ,在酵母 Pichia pastoris中实现了重组人 MMP- 9蛋白的高效、高活性、分泌表达 .首先用 PCR扩增了 MMP- 9基因编码区 (不含信号肽序列 ) ,经测序证实后 ,将其插入 p PIC...
蓝琼脂糖珠在纯化人血清α_1抗胰蛋白酶中的应用
2007/12/21
摘要 α_1抗胰蛋白酶(α_1-Antitrypsin,简称A_1AT)是人体血浆中含量最多的一种蛋白酶抑制物,对于维持体内蛋白酶的平衡具有重要作用。自Laurall等(1963)发现遗传性A_1AT缺乏的个体易罹患肺气肿与肝硬化等疾病后,A_1AT的研究遂引起广泛注意。近年来还认为A_1AT的检测有助于肝癌的诊断。A_1AT的制备方法据报道一般较为繁琐,而且得率和纯度也欠满意。为此,我们利用C...
人睾丸前列腺素D合成酶在毕赤氏酵母中的表达、纯化及鉴定
前列腺素D合成酶 酵母表达系统 金属亲合层析 糖基化
2007/12/18
摘要 L PGDS是一种双功能蛋白 ,即催化PGD2产生和运输亲脂 疏水分子 .L PGDS主要分布于脑和男性生殖器官 ,并分泌到脑脊液、血清、精液、尿液等体液中 .测定体液中L PGDS的含量可辅助诊断一些神经系统疾病、生殖系统疾病、心血管疾病和肾脏疾病等 .在毕赤氏酵母中表达人睾丸前列腺素D合成酶 ,以利于进一步的生物学功能及临床应用研究 .用PCR的方法从质粒pGEX 2T htL PGD...
中国人端粒酶催化亚基(hTERT)基因 第六内含子VNTR多态性研究
端粒酶 端粒酶催化亚基 基因多态性 VNTR
2007/12/7
摘要端粒酶的激活在肿瘤发生、衰老以及细胞永生化过程中起重要作用，端粒酶催化亚基(hTERT)的表达是诱导端粒酶活性的限制性步骤，hTERT的表达受到复杂的调控。hTERT基因组全长40 kb,包含16个外显子及15个内含子，其中，在第2和第6内含子中各存在2个可变数目串联重复(VNTR)多态性序列(VNTR2-1st、VNTR2-2nd以及VNTR6-1st和VNTR6-2nd),在第12内含子存...
乙醛脱氢酶2（ALDH2）基因研究进展及其与饮酒行为的关系Aldehyde Dehydrogenase (ALDH2) Polymorphism and Drinking Behavior*
乙醛脱氢酶2 多态性 饮酒行为
2007/12/7
摘要亚洲人群中普遍存在突变型的乙醛脱氢酶2（ALDH2*2）。此酶突变后活性缺失，导致乙醛在肝脏内大量累积使突变携带者在喝酒后会有脸红等不适反应，因此这可能影响他们的饮酒行为。由于ALDH2*2等位基因与饮酒行为相关，它也可能与酒精引起的肝脏损伤及某些癌症密切相关，而且，它在不同的亚洲人群中有不同的频率分布。近年来对ALDH2*2等位基因的序列结构、表达及其重要功能等有了更深入的了解，对ALDH2...