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国际微生物学权威杂志《微生物学进展（Trends in Microbiology）》（最新影响因子: 18.230）发表了植保所作物病原生物功能基因组研究创新团队应邀撰写的题为 “Antiviral RNAi drives host adaptation to viral infection” 的热点综述论文。该论文对目前国际上抗病毒RNAi的研究进行了总结与评论，为植物病毒学研究和发展提出了新的...
大豆花叶病毒（soybean mosaic virus，SMV）病是全球最主要的大豆病害之一，严重危害大豆的产量和品质。RNA干扰(RNA interference,RNAi)能够在mRNA水平特异性沉默同源靶基因，为抗病毒作物的培育提供了新的途径。本研究对国内外11个不同SMV流行株系的HC-Pro基因进行了核苷酸序列比对，并以SC3株系的cDNA为模板克隆出高度保守的268 bp的基因片段，进...
RNAi技术在大豆中的应用及展望
RNAi 大豆 靶基因
2015/11/10
RNAi(RNA interference)作为一种重要的基因沉默技术，已在农作物研究中得到广泛应用。该文介绍了RNAi的作用机理，并对国内外RNAi在大豆功能基因组学、抗病虫和品质改良研究中的应用及研究进展进行简要概述，指出目前仍存在的一些问题，同时阐明RNAi在大豆研究中的应用前景。
蓖麻细胞色素P450基因片段的克隆及RNAi表达载体的构建
蓖麻 P450 RNAi 载体构建
2013/9/5
采用PCR方法克隆了蓖麻细胞色素P450基因的正反2个片段。正向片段长为525个碱基,反向片段长为421个碱基。经测序分析,得到的正向基因片段和反向基因片段与GenBank 上的蓖麻细胞色素P450基因(XM_002525863.1)的碱基同源性分别为98.85%和99.51%。利用载体pHANNIBAL和限制性内切酶将正反2个片段连接成具有发夹结构的中间载体pHAN-P450S-P450A,然后...
RNAi机制可以通过dsRNA诱导同源mRNA的降解，从而导致该基因转录后沉默。RNA干扰作用从发现以来就具有了利用转录后基因沉默（PTGS）来进行抗虫的一种潜在可能性。针对dsRNA的这种作用，研究中提取蚜虫RNA，克隆出蚜虫Cathepsin B基因的干扰片段并构建出RNAi载体，转入本氏烟草中，在转基因烟草体内表达dsRNA。成功构建RNAi载体后，通过农杆菌转化和叶盘法将RNAi载体导入烟...
多浆旱生植物霸王质膜Na╋/H╋逆向转运蛋白基因RNAi载体构建
霸王 ZxSOS1 RNAi载体构建
2013/7/21
以多浆旱生植物霸王(Zygophyllum xanthoxylum)幼苗根系为材料，采用RTPCR方法获得了其质膜Na+/H+逆向转运蛋白基因ZxSOS1的片段，以中间载体pHANNIBAL和植物表达载体PART27为基础，采用酶切连接的方法构建了CaMV 35S启动子驱动的含ZxSOS1基因片段反向重复序列的RNAi植物表达载体PARS，为利用RNAi技术深入研究ZxSOS1在霸王体内Na+转...
白菜转脂蛋白-CaMBP10基因RNAi沉默体系的初步建立
遗传转化 脂蛋白-CaMBP10基因 初步建立
2011/8/24
为了研究白菜转脂蛋白-CaMBP10的体内功能，构建含有该基因片段的RNAi质粒，以农杆菌介导法对大白菜‘津育60’进行遗传转化，通过对转基因植物在生物与非生物胁迫中表型变化的研究，确定其体内功能。本文报告RNAi质粒的构建、鉴定及其转化植株基因组DNA中外源片段的鉴定。DNA分析结果显示外源基因已成功插入了白菜基因组，RT-PCR检测结果显示转化植株内源CaMBP10基因的表达明显降低，为后续的...
可溶性淀粉合成酶Ⅱ（SSⅡ）是小麦籽粒支链淀粉合成的主要角色，但是其三个部分同源基因（SSⅡ-A、SSⅡ-B和SSⅡ-D）对支链淀粉合成的贡献大小目前还未见报道，探究它们对支链淀粉合成的作用，对小麦淀粉合成的遗传操纵和淀粉品质改良具有重要意义。此文通过RT-PCR方法克隆了小麦SSⅡ-A基因cDNA的部分序列（长度为539 bp），经序列比对发现，它与AB201445.1（Triticum aes...
为了阐明己克隆的水稻C端结合蛋白家族基因OsCtBP-A的功能,构建了该基因的过量表达和RNAi沉默载体,通过农杆菌介导转化水稻品种日本晴愈伤组织,分别获得了45个过量表达和75个RNAi 沉默T0代转基因植株,并进行了PCR和GUS染色鉴定。T1代过量表达株OsCtBP-A基因表达量明显增加,苗期根系生长增加,对水稻白叶枯病抗性无明显变化；而基因沉默株OsCtBP-A基因表达量显著下降,苗期根系...
紫花苜蓿锌指蛋白基因RNAi表达载体的构建及在苜蓿的转化
紫花苜蓿 锌指蛋白 RNAi 转基因
2010/3/2
根据紫花苜蓿锌指蛋白MsZFN基因(GenBank登录号为EU624138)序列，设计两对含有酶切位点的特异性引物，以紫花苜蓿cDNA为模板，分别合成用于构建干扰载体的正反义片段，将正反义片段分别插入表达载体pART27的相应位置，构建成含有发夹结构的RNAi载体pART-F-R。利用农杆菌介导方法，将pART-F-R转化到紫花苜蓿中，经过PCR检测，获得了3株转基因植株。经过RT-PCR检测，证...
采用一种新型RNAi载体培育转基因高直链淀粉马铃薯
RNAi nos终止子 反向重复序列 高直链淀粉马铃薯
2009/11/3
采用PCR技术分别克隆nos终止子、烟草axi1内含子和烟草ubi.u4启动子，亚克隆部分与马铃薯Sbe1同源、部分与Sbe2同源的融合基因SIII，构建具有“ubi.u4启动子—反向SIII—反向nos终止子—axi1内含子—正向nos终止子”结构的异源3¢端UTR反向重复序列型RNAi载体pCUSNI，采用农杆菌介导法转化马铃薯品种陇薯3号、甘农薯2号和大西洋，获得了16个转基因植株...
【目的】阐明油菜基因BnWRI1对其种子含油量的影响。【方法】采用RT-PCR技术从油菜中克隆到BnWRI1基因编码区内384 bp的片段，将该片段正反向插入干扰载体pGΩ4ARi中，构建成RNAi表达载体pGΩ4ARi-WRI1，通过花粉管通道法将其转入油菜受体品种中双9号中，【结果】获得3棵转基因植株，PCR扩增和基因组Southern杂交证实外源片段已整合在受体油菜基因组中。利用半定量RT-...
农杆菌介导的双SBE基因RNAi载体对水稻的遗传转化
水稻 淀粉分支酶 转基因 RNA干涉
2009/6/5
[ 目的] 提高水稻中直链淀粉的含量, 扩大稻米的利用范围。[ 方法] 以水稻中花11 品种为材料, 通过农杆菌介导法, 侵染水稻幼胚
诱导出的愈伤组织, 将淀粉分支酶基因SBE1 和SBE3 同时导入受体愈伤组织, 经过一系列的共培养、预分化、分化、生根壮苗后, 获得含
有转基因的转化植株, 并对转化植株进行PCR 鉴定。[ 结果] 通过用根癌农杆菌介导法, 侵染由水稻幼胚诱导的274 粒...
浅析RNAi技术的应用及发展前景
RNAi技术 基因治疗 基因功能 生物品种改良
2009/5/19
RNA 干涉( RNAinterference , RNAi) 作为研究基因治疗、基因功能、生物品种改良等方面的一种有效方法已经被研究者广泛接受。
作为基因抑制的一种有力工具, 与其他的方法相比,RNAi 的操作过程更简单, 成功率更高。通过RNAi 可以实现对特定的mRNA 的选择
性降解, 进而抑制其翻译过程。对RNAi 技术的应用及发展前景进行了探讨。